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李軻反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）是一種體外核酸擴增技術(shù)，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點，能在幾個小時內(nèi)完成從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產(chǎn)物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用于人和動物的多種傳染病早期診斷。筆者一直從事實驗室動物疫病檢測工作，現(xiàn)就應(yīng)用RT-PCR實驗方法過程中出現(xiàn)的一些常見污染問題做如下論述，僅共同行參考和探討。RT-PCR實驗有三步：提取RNA、反轉(zhuǎn)錄（RT）、PCR擴增及擴增產(chǎn)...

輔助方案：膠原酶消化制備脾臟細胞懸液實驗材料：1.4000U/ml膠原酶D，融化后置于冰上2.HBSS，已滅菌，含Ca+、Mg2+（購置于LifeTechnologies）3.小鼠脾臟4.皮下注射針，22G×11/2in內(nèi)徑（BectonDickinson）5.10ml、5ml一次性注射器（如BectonDickinson）6.100mm直徑培養(yǎng)皿（如Falcon）7.2個高壓滅菌鍋的鋸齒狀解剖鑷（如Roboz）8.高壓滅菌的不銹鋼網(wǎng)：將40目的不銹鋼網(wǎng)剪成5cm×5cm的小...

腫瘤是細胞在各種致瘤因素的作用下，基因發(fā)生改變，失去對其生長的正常調(diào)控，導致細胞異常增生。惡性腫瘤又稱為癌癥（cancer），是目前危害人類健康zui嚴重的一類疾病。我國城市地區(qū)居民死因*位為惡性腫瘤。腫瘤細胞在很多生物學特性上不同于正常細胞，也有別于修復性增生的細胞，具有明顯的去分化現(xiàn)象。一、腫瘤細胞的分化特征惡性腫瘤細胞的特征之一是分化程度低，表現(xiàn)為形態(tài)上的幼稚性，功能上的異常，細胞的多種表型（phenotype）又回到原始的胚胎細胞表型，即發(fā)生細胞的去分化現(xiàn)象。機體在致...

生物、藥物等許多的研究均需要通過觀察細胞體積的變化或細胞數(shù)目增減的來判斷和評估實驗的效果。由于細胞所處環(huán)境的改變可促使其自身體積做出相應(yīng)的變化，以便適應(yīng)改變后的環(huán)境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道該種細胞體積變化規(guī)律，因此必須檢測其體積或細胞數(shù)目隨條件、時間的變化。細胞的發(fā)育與細胞分裂周期級數(shù)遞增均需要連續(xù)不斷的細胞增殖。在培養(yǎng)液中正在增殖的細胞在其分裂前其體積將增大至原體積的兩倍。然而對細胞發(fā)育與分裂的速度作如何調(diào)整才能保證細胞體積的不變并不明確。因此，測量細胞的體積的變...

二、實驗原理細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學和生物化學特征。在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體，凋亡小體zui后被吞噬...

（一）原理混合單個核細胞懸液在通過尼龍毛柱時，B細胞、漿細胞、單核細胞和一些輔助細胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數(shù)T細胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細胞群的有效方法。（二）材料及試劑1．尼龍毛（FemwallLaboratories,LP－1LeukoqakleukocyteFilters）。2．燒杯、鋁箔、漏斗、一次性手套等。3．裝填尼龍毛柱，一次性注射器。4．取自然沉降的上層血漿，過聚蔗糖—泛影葡胺分層液后，獲取的血漿和分層液之間的單個核細胞層。（三）操作方法1．尼龍毛...