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如何正確選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2010/7/1 [1861]

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇是醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中首先要考慮的問(wèn)題。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇恰當(dāng)與否關(guān)系到課題質(zhì)量的高低、經(jīng)費(fèi)開(kāi)支的多少、研究途徑正確與否以及實(shí)驗(yàn)方法 的簡(jiǎn)單與繁瑣問(wèn)題,甚至?xí)绊懙秸n題的成敗及研究結(jié)果正確性。因此,必須從觀念上將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇看作科技項(xiàng)目立項(xiàng)查新的文獻(xiàn)檢索一樣,作為醫(yī)學(xué)科研工作中的一個(gè)有機(jī)組成部分。同時(shí),必須從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的學(xué)科高度給予足夠的重視。其次,要了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)基本知識(shí),這是正確選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本條件。

常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:
袋鼠有袋目、犰狳貧齒目、刺猬食蟲(chóng)目、蝙蝠翼手目、兔、鼠兔兔形目、大鼠、小鼠、地鼠、豚鼠嚙齒目、江豚鯨目、海狗鰭足目、馬、騾、驢奇蹄目、豬、牛、羊、鹿偶蹄目、狗、貓、鼬食肉目、獼猴、黑猩猩靈長(zhǎng)目等。

生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本原則
1.
選用與人的機(jī)能、代謝、機(jī)構(gòu)和疾病特點(diǎn)相似的動(dòng)物。
非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物----進(jìn)化程度zui高,是zui接近與人類的理想動(dòng)物,如,獼猴。
其他動(dòng)物----雖進(jìn)化程度低些,但可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康模纾⒇垺⒇i等。
2.
選用解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物、充分利用不同品種品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存在的某些特殊反應(yīng)。
:
開(kāi)胸和心臟實(shí)驗(yàn)----適宜選用兔做實(shí)驗(yàn);
發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實(shí)驗(yàn)-----適宜選用兔做實(shí)驗(yàn);

觀察藥物對(duì)排卵的影響,進(jìn)行避孕藥
研究-----適宜選用兔、貓;
動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)-----適宜選用兔、豬、猴;
肝外科實(shí)驗(yàn)研究------適宜選用大鼠;
膽囊功能研究------不能選用大鼠;
嘔吐實(shí)驗(yàn)----適宜選用猴、貓;
變態(tài)反應(yīng)、Vc缺乏癥研究----適宜選用豚鼠;
對(duì)帶有雌激素活性的藥物進(jìn)行避孕藥效研究----不能選用小鼠、大鼠;
同品種不同品系的動(dòng)物存在有很多特殊的反應(yīng),應(yīng)注意選擇應(yīng)用。

3.根據(jù)課題研究目的內(nèi)容選用
相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物
標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物系指,經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營(yíng)養(yǎng)控制而繁育的動(dòng)物。
微生物學(xué)、環(huán)境及營(yíng)養(yǎng)的控制才能排除動(dòng)物因攜帶影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的微生物、寄生蟲(chóng)及潛在疾病對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響。
遺傳學(xué)的控制才能排除實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因雜交、遺傳學(xué)污染而造成個(gè)體之間的差異,影響結(jié)果的可重復(fù)性。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳類別選擇
近交系----其動(dòng)物遺傳的均質(zhì)性保證了實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的穩(wěn)定性;
封閉群----能較好地代表自然群體的遺傳特性;
F1
雜交群----在一定程度上,兼有近交系和封閉群的特點(diǎn);
突變動(dòng)物----往往具有鮮明的人類疾病模型特征。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具體品種品系選擇
如果實(shí)驗(yàn)結(jié)論只針對(duì)某一品系則使用一個(gè)品系;
如果實(shí)驗(yàn)結(jié)論針對(duì)整個(gè)物種在內(nèi)的一般性研究則使用多個(gè)不同來(lái)源的品種、品系。
一般對(duì)多物種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)先選小型動(dòng)物,再推廣到大型物種;要求只能建立在對(duì)多個(gè)物種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,才能推廣到人類,也稱動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外推。常用順序時(shí)小鼠、大鼠、兔、犬、猴。

微生物級(jí)別選擇
普通級(jí)----一般為教學(xué)示范用;
清潔級(jí)----國(guó)內(nèi)科研工作要求的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)  物,適合于大多數(shù)科研課題;
SPF
級(jí)----標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物;
無(wú)菌動(dòng)物-----僅在特殊課題需要時(shí)使用。

4.選用與實(shí)驗(yàn)要求相適應(yīng)的
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物規(guī)格
年齡----年齡不同,其生物學(xué)特性往往不同,一般選性成熟后的青壯年動(dòng)物。太小的動(dòng)物的生理功能未達(dá)到成年水平。太老的動(dòng)物的各器官老化,代謝功能下降,只在老年醫(yī)學(xué)研究中使用;
體重----在正常營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下,體重與年齡有一定的相關(guān)性;
性別----許多實(shí)驗(yàn)證明,同一品種(系)不同性別的動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)不一致。

5.選用人獸共患疾病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和傳統(tǒng)應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
有些病因造成人和動(dòng)物共同患病,其臨床過(guò)程、病理變化也相似,所以就應(yīng)選用這樣的動(dòng)物來(lái)研究人類疾病;
選擇科研、檢驗(yàn)和生產(chǎn)中傳統(tǒng)使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。通過(guò)實(shí)踐積累,各個(gè)專業(yè)均會(huì)在某些方面的課題選定自己常用的動(dòng)物品種系。

6.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和應(yīng)用需注意
符合相應(yīng)的規(guī)范
上普遍要求動(dòng)物實(shí)驗(yàn)達(dá)到實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范(GLP)和標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。這些規(guī)范對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和應(yīng)用、實(shí)驗(yàn)室條件、工作人員素質(zhì)、技術(shù)水平、操作方法都要求標(biāo)準(zhǔn)化。這是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇和應(yīng)用的總的要求。
遵循上的3R規(guī)則-----減少動(dòng)物用量、實(shí)驗(yàn)要精細(xì)、盡量采用替代物。


傳出神經(jīng)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

在測(cè)定新藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)(LD50)時(shí),動(dòng)物如出現(xiàn)豎毛,活動(dòng)增加,激動(dòng)興奮,以致發(fā)展為強(qiáng)直一陣攣性抽搐,可初步考慮為擬交感藥。進(jìn)而可觀察其動(dòng)物(或貓)血壓的反應(yīng),如興奮α-受體,則對(duì)血壓影響較大,并反射地使心率減慢,如興奮β受體,可見(jiàn)血壓下降和心率明顯增快。為了較確切地區(qū)分其對(duì)α β受體的作用,還可采用α受體阻斷藥酚妥拉明,β受體阻斷藥心得安等作為工具。除血壓實(shí)驗(yàn)外,尚可采用貓瞬膜,貓(或狗)在體腸活動(dòng)等實(shí)驗(yàn)方法。利用一些 體外實(shí)驗(yàn)可分析擬交感藥的作用部位,其中zui敏感的實(shí)驗(yàn)之一是大白鼠胃底條,此外有兔頭肌、離體兔耳、豚鼠氣管鏈、豚鼠回腸和雞盲腸等制備。可用已知的α β-受體興奮劑作為標(biāo)準(zhǔn),觀察它們與αβ-受體阻斷藥的相互作用,而確定其作用部位。

乙酰膽鹼具有毒蕈堿樣及菸堿樣作用,前者可被阿托品阻斷,后者可被神經(jīng)節(jié)阻滯藥及橫紋機(jī)松馳藥阻斷。凡是通過(guò)直接或間接作用興奮副交感效應(yīng)點(diǎn)的藥物 可出現(xiàn)流淚、流涎、排尿和排便癥候群。因此在小白鼠LD50實(shí)驗(yàn)中可獲得初步印象,進(jìn)而分別觀察其對(duì)血壓、唾液、瞳孔及胃腸道等反應(yīng)。在貓血壓實(shí)驗(yàn)、蛙 心、蛙腹直肌、水蛭背肌等標(biāo)本上可檢定擬膽堿藥和觀察抗膽堿藥的作用,亦可用整體實(shí)驗(yàn)如抑制大白鼠胃潰瘍,抑制大白鼠腸內(nèi)活性炭下移等方法觀察之。


消化道平滑肌實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

多種動(dòng)物的離體腸道可用來(lái)試驗(yàn)傳出神經(jīng)藥物,一般多用離體豚鼠及兔的腸道。豚鼠回腸的自發(fā)活動(dòng)較少,描記時(shí)有穩(wěn)定的基線,適合作藥物鑒定用。兔腸 (尤其空腸)具有規(guī)則的擺動(dòng)運(yùn)動(dòng),適用于觀察藥物對(duì)此動(dòng)物的影響。豚鼠回腸標(biāo)本加負(fù)荷后已*松馳,因此加入擬交感藥不會(huì)使其更松馳。

離體豚鼠回腸可用于觀察乙酰膽堿(Ach)和擬膽堿藥的劑量-反應(yīng)關(guān)系;可檢定Ach和擬膽堿藥的含量。離體兔空腸有節(jié)律性收縮活動(dòng),可觀察腎上腺 素(4μg)、去毒豆堿(2μg)等藥物對(duì)空腸擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)的影響。大白鼠胃底條是檢定兒茶酚胺類藥物和5-羥色胺(5-HT)zui敏感的標(biāo)本。主要觀察藥物對(duì) 胃縱行肌的作用,因標(biāo)本中環(huán)形肌已切斷。經(jīng)檢定兒茶酚胺對(duì)其敏感度要比大白鼠子宮標(biāo)本大10100倍。雞食道由副交感神經(jīng)支配,因此離體雞食道標(biāo)本適合 于試驗(yàn)擬副交感藥物。由于其作用不能*被神經(jīng)節(jié)阻斷藥所阻滯,故不宜用于試驗(yàn)作用于神經(jīng)節(jié)的藥物。


心血管實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

血壓實(shí)驗(yàn)是檢驗(yàn)傳出神經(jīng)藥物極其敏感的方法,一般采用急性血壓實(shí)驗(yàn),動(dòng)物中以狗、貓、兔和大白鼠常用。兔不適用于降壓實(shí)驗(yàn),因其易于死亡。實(shí)驗(yàn)可用 麻醉或毀腦動(dòng)物,因麻醉動(dòng)物的血壓常有三級(jí)波動(dòng)(*級(jí)波動(dòng),又稱脈搏性波動(dòng),系每次心搏影響血壓所致,第二級(jí)波動(dòng),又稱呼吸性波動(dòng),即吸氣時(shí),血壓微升,呼氣時(shí)血壓微降;第三級(jí)波動(dòng),系血管運(yùn)動(dòng)中樞以稍長(zhǎng)間隔,興奮性周期性改變),使血壓升降不穩(wěn)。如動(dòng)物毀腦后,可排除脊髓以上的中樞神經(jīng)神經(jīng)對(duì)血壓的 影響,只出現(xiàn)*級(jí)波動(dòng),血壓曲線極不平衡。
離體兔主動(dòng)脈條實(shí)驗(yàn):兔主動(dòng)脈上含有α-受體,它是測(cè)定作用于α-受體藥物的一個(gè)很好標(biāo)本,已被廣泛用來(lái)鑒定和分析擬交感藥及其對(duì)抗藥的作用。兔主動(dòng)脈制備曾試制過(guò)多種形式,如主動(dòng)脈環(huán)、片及條狀等,但兔主動(dòng)脈螺旋條是zui合適的方法之一。此標(biāo)本有較多優(yōu) 點(diǎn),如一個(gè)主動(dòng)脈可制作34個(gè)標(biāo)本,可供配對(duì)試驗(yàn),對(duì)低濃度擬交感藥就很敏感,組織穩(wěn)定性好,可維持較長(zhǎng)時(shí)間。

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